1. 原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，此有色物质在625nm波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物质的吸光度值可计算样品中葡萄糖的含量。
2. 适用范围适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食物样品和血液样品。检出量为0.02mg。
3. 仪器
722型分光光度计。
4. 试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。（1）无水乙醇。（2）40％三氯乙酸：称取40g三氯乙酸，用水溶解并稀释至100mL。（3）2mol/L NaOH溶液：称取8g NaOH，用水溶解并稀释至100mL。（4）1％邻联甲苯胺溶液：称取0.1g邻联甲苯胺溶解于10mL无水乙醇中，倒入棕色瓶中，4℃冰箱保存。（5）乙酸缓冲液（pH5.0）：称取14.28g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）溶于水中，加入2.7mL冰乙酸，并调节pH5.0，用水定容至1L。（6）葡萄糖氧化酶溶液：称取一定量的葡萄糖氧化酶（Sigma公司）用水溶解，使酶含量为100U/mL。4℃冰箱保存一周。（7）过氧化物酶溶液：0.010g辣根过氧化物酶溶于10mL水中，4℃冰箱中保存一周。（8）酶溶液：取100mL乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各1mL，混匀。4℃冰箱可保存7周。（9）酶空白液：取100mL乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各1mL，混匀。4℃冰箱保存1周。（注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶）。（10）葡萄糖标准液：将葡萄糖标准品（纯度大于99％）于80℃干燥至恒量。精确称取0.050g，用水移入100mL容量瓶中，定容至刻度线。相当于浓度为0.5mg/mL。
5. 操作步骤（1）样品处理：
① 固体样品：称取0.5～0.5g已粉碎的样品于锥形瓶中，加入50mL水后沸水浴15min。冷却后，转移至100mL容量瓶中并用水定容至刻度。反复摇动混匀样品，过滤，弃初始几滴滤液。收集滤液。如果滤液澄清，可直接或经进一步稀释后用于测定。如果滤液浑浊，吸取20mL滤液转移至另一容量瓶中，加入无水乙醇至刻度。混合后静置至少30min。过滤，滤液用于测定。
② 液体样品或寡糖、淀粉等碳水化合物水解液：吸取2～10mL样品或水解液，加入4倍量无水乙醇（使乙醇终浓度为80％），混合。静置至少3000r/min，离心15min，上清液备用）。
③ 新鲜牛乳等样品：吸取0.5～2mL样品，用水稀释，加入3mL40％三氯乙酸溶液。用水定容至100mL，过滤。吸取5mL滤液，用2mol/L NaOH调节pH至中性，用水定容至10mL，备用。
[注：样品处理中80％乙醇的用途是沉淀不溶性多糖和部分蛋白质，40％三氯乙酸用于沉淀蛋白]（2）测定：标准管和样品测定管，按下表所列操作（单位：mL）。

将上述试剂混合后37℃水浴反应15min，625nm测定吸光度值。
[注意：葡萄糖与酶溶液的成色反应与反应时间密切相关，如反应时间过长，溶液颜色会由蓝转变成灰色，并慢慢产生沉淀，所以反应时间应严格控制好]
6. 计算根据吸光度值求出葡萄糖标准曲线的回归方程，采用插入法求出样品测定管中葡萄糖含量，再根据稀释定容体积和称样量，计算出样品中葡萄糖含量。
式中 ω——样品中葡萄糖含量，g/100g；
ms——由标准回归方程求出的样品测定管中葡萄糖含量，mg；
mb——由标准回归方程求出的样品空白管中葡萄糖含量，mg；
V——样品定容体积，ML；
f——稀释倍数；
0.5——测定时吸取样品提取液的体积，mL；
m——样品质量，g；
0.1——将mg/g转换成g/100g的系数。
7. 注意事项（1）此方法中的酶溶液只能和葡萄糖反应，特异性强，灵敏度高。（2）如果样品提取认为无色，无需做样品空白。但是有些样品颜色很深，如饮料、菌藻类食物，或样品提取液浑浊，往往干扰测定结果但又难以去除，所以测定这类样品时需做样品空白管以减少干扰。