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| 叶酸的测定方法（微生物测定法） |
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| 整理时间：2008-7-5 11:24:00 查看次数：510 关键词：叶酸，维生素
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| 叶酸是一种重要的B族维生素，其结构是由一个蝶啶与一个对氨基苯甲酸给合成蝶酸，再与一个或多个谷氨酸结合而成，其化学名称为蝶酰谷氨酸（pteroylglutamate，pteGlu）。通常意义上，叶酸指的是一组具有蝶酰谷氨酸结构和相关生活性的同效维生素。它的英文名称包括folic acid,foalte,folates,folacin，一般可以互用。
叶酸外观为淡黄色结晶粉末，微溶于水，其钠盐易于溶解。不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。叶酸对热、光敏感，在酸性条件下不稳定，在碱性和中性溶液中对热敏感。
叶酸的测定方法主要有微生物法、HPLC法、荧光法和放射免疫法等。后几种方法因快速等优点受到青睐，尤其是HPLC法近年来发展迅速。但是由于叶酸衍生物繁多，标准品来源有限－各种衍生物需从不同化学公司或实验室购买，有的甚至需要自行合成；食品中存在多种干扰因素等问题，使分析方法的使用受到限制。微生物法是测定叶酸的经典方法，目前美、英、日等国家仍采用此法用于测定食物成分中叶酸含量。微生物法所选用的菌种可利用培养基中叶酸单谷氨酸或双谷氨酸盐进行生长，灵敏度较高，但是检测需要的时间较长。天然食物中大部分叶酸为多谷氨酸盐，所以在测定之前，需用轭合酶（conjugase）对叶酸进行水解。 |
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1. 原理叶酸是酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei，L.C，ATCC 7469简称L.C）生长所必需的营养素。在一定条件下，L.C的生长繁殖与培养基中叶酸含量呈正比关系，细菌增殖的量以光密度值计，通过与标准曲线相比较，计算出样品中叶酸的含量。
2. 适用范围参考Methods of Vitamin Assay，第四版。本方法适用于各类食物中叶酸的测定。检测限为0.1ng。
3. 仪器与设备（1）恒温培养箱。（2）离心机。（3）高压消毒锅。（4）振荡器。（5）接种针和接种环。（6）分光光度计。
4. 试剂除特殊说明外，本实验中所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。（1）菌种：酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei，L.C，ATCC 7469）。（2）磷酸缓冲液（0.05mol/L，pH6.8）：称取4.35g Na3PO4·12H2O，10.39g Na2HPO4·7H2O溶解于800mL水中。临用前用约5g抗坏血酸调节pH至6.8 [注意：叶酸对光、热敏感，易被氧化破坏，抗坏血酸有助于保护叶酸被氧化]。（3 |
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