近年来对多糖的研究在分子生物学和细胞生物学领域愈来愈引起人们的重视通过对天然植物中多糖的提取分离改造提高活性亲和性特异性和生物利用度使得这一高分子聚合物在生命科学领域的研究有了重大进展例如香菇多糖在医学上作为免疫调节剂来治疗肿瘤肝炎等疾病[1] 大豆多糖的提取方法为大豆水溶液提取精制浓缩干燥大豆多糖[2] 无论是在天然植物中提取分离精制多糖的生产工艺中还是在多糖的应用研究中对多糖的分析方法是必需的概括起来糖的分析方法主要有四种(1)化学分析法[3] 该方法只能测定出总糖和还原糖的含量无法测定出不同种类糖的含量和定性分析而且样品具有颜色或其它还原性物质时对分析结果的准确度影响很大用于多糖的生产工艺及应用研究中不够理想(2) 纸层析或板层析法[3] 该方法在定性定量分析上也不够理想(3)高效液相色谱法[3] 采用胺基柱示差折光检测器乙晴水=70:30(体积比)为流动相测定多糖是一种较理想的方法但仪器昂贵分析费用较高不利于普及(4)气相色谱法[4] 以往的方法是以吡啶为溶剂将糖衍生化为挥发性三甲基硅醚衍生物然后进行气相色谱分析而气相色谱法中使用吡啶为溶剂时存在着吡啶毒性较大危害环境和分析工作者健康吡啶极性大使溶剂峰拖尾造成定量不够准确要求无水操作及样品在吡啶中难溶解使操作繁琐等缺点本文讨论了以二甲基亚砜和环乙烷为溶剂以六甲基二硅氨烷和三甲基氯硅烷为衍生化试剂以环己烷为萃取剂用衍生化-萃取法处理多糖样品采用填充柱气相色谱法测定了大豆提取液中的多糖含量

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

GC-16A 气相色谱仪(岛津) 色谱柱为F3mm 1m 玻璃柱(岛津) 固定相为Shimalite W(60-

80 目)涂OV-17 固定液液担比为1.5%(日本信和化工株式会社) 环乙烷二甲基亚砜六甲

基二硅氨烷三甲基氯硅烷肌醇阿戊糖鼠李糖果糖蔗糖棉籽糖水苏糖均为分析

纯试剂

1.2 标准样品的配制

(各物质的质量均折成100%计)糖标准样依次取蔗糖棉籽糖水苏糖各500mg 左右(称

准到0.001g)于100mL 容量瓶中加水溶解并定容到刻度每次取2.0mL 分别置于25 支5mL 的

具塞比色管中在真空度为0.09MPa 温度为60°C 蒸发至干以每组5 支比色管分成五组备用

二甲基亚砜标准样取500mg 肌醇(称准到0.001g)于100mL 容量瓶中加入二甲基亚砜溶解并

定容到刻度配成含肌醇5mg/mL 的二甲基亚砜标准样

1.3 色谱条件

进样温度为320°C 检测器(FID)温度为300°C 柱温120°C(保持1min)升温到330°C(保持

8min),升温速率为20°C/min N2 为载气(40mL/min) 进样为1.0mL

1.4 最佳衍生化-萃取条件的确定

在室温下取上述三组标样依次加入1.0mL 二基亚砜标准液1.0mL 环己烷

1.4.1 衍生化试剂用量对拖尾峰(tailing peak)。前者少见。>色谱峰面积的影响取第一组标样依次加入衍生化试剂2.4 2.7 3.0

3.3 3.6mL V(六甲基二硅氨烷):V(三甲基氯硅烷)=2:1 振荡时间为10min 静止时间为1h 依

次进样测定色谱基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面积

1.4.2 静止时间对色谱峰面积的影响 取第二组标样依次加入衍生化试剂3.0mL 振荡时间为

10min 静止时间分别为30 40 50 60 70min 依次进样测定色谱峰面积

1.4.3 振荡时间对色谱峰面积的影响 取第三组标样依次加入衍生化试剂3.0mL 振荡时间分

别为4 6 8 10 12min 静止时间为1h 依次进样测定色谱峰面积

由以上单因素影响实验结果可知当衍生化试剂用量为2.7mL 以上时静止时间为40min

以上时振荡时间为8min 以上时样品中各组分的色谱峰面积达到最大值因此最佳衍生化

萃取条件确定为衍生化试剂用量为3.0mL V(六甲基二硅氨烷):V(三甲基氯硅烷)=2:1 静止时

间为50min 振荡时间为10min 取上层液进样1.0mL

1.5 定性定量方法

已知物对照法定性内标法(肌醇为内标物)定量

2 结果与讨论

2.1 相对校正因子保留时间和方法回收率的测定与计算

分别取第四五组糖标样衍生化后进样三次取平均值分别计算各组分的相对校正因子保留时间和回收率肌醇蔗糖棉子糖水苏糖的保留时间分别为5.88 8.39 10.99 14.51min相对校正因子分别