摘要：目的：建立测定复方甘草甜素片中甘草酸单铵盐及两种氨基酸含量的方法。方珐：采用RP-HPLC法测定复方甘草甜素片三组分的含量。流动相为乙腈：0.025 mol／L NaAC-DMF(4O：60，v／v)，固定相为ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，双波长检测，检测波长256nm和360nm。结果：甘草酸单铵盐在4Oμg／ml～300μg／ml范围和两种氨基酸在20μg／ml～120μg／ml范围线性相关良好(r=0.9996，r=0.9997．r=0.9998)，回归方程为Y=14318X+724.64．Y=265416X，Y=142768X一5023，平均回收率分别为98.41%(RSD=1.8O％)、101.36%(RSD=1.2O%)和101.56%(RSD=2.O5%)。结论：HPLC法测定复方甘草甜素片中三组分简便、准确、重现性好，可作为该制剂质量检验的定量方法。 
    关键词：复方甘草甜素片；高效液相色谱法；甘草酸单铵盐；甘氨酸；蛋氨酸；含量测定 
    复方甘草甜素制剂(商品名：美能；英文名：Stronger Neo—minophagen，SNMC)于1948年在日本生产面市，2O世纪8O年代正式报道作为治疗慢性肝炎的制剂应用于临床。美能片处方由甘草酸单铵盐、甘氨酸、DL-蛋氨酸组成，用于治疗慢性肝病，可改善肝功能，具有细胞膜保护作用，疗效确定，用药安全，临床应用广泛。美能中甘草酸单铵盐、甘氨酸、DL-蛋氨酸的含量测定分别采用HPLC法、薄层色谱法和反滴定法，操作步骤较为繁杂，本研究依据文献和实验摸索确定使用RP-HPLC法测定本品中甘草酸单铵盐及两种氨基酸的含量，具有样品前处理操作简单、保留时间短、分离度较好的优点，结果显示该法准确、重现性好，可作为本品的质量控制标准。 
    l 仪器与试药 
    1．1 仪器岛津UV-2401紫外一可见分光光度计；P230高效液相色谱仪；BP21ID精密天平(日本AND)；Hitech超纯水机；pHS-3型精密pH计(上海精科雷磁仪器厂)；GB11240-80型恒温水浴锅。 
    1．2 药品试剂 复方甘草甜素片(日本美能发源制药公司制造，批号：9O9O2B)；甘草酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0731—200205)；甘氨酸对照品(西安化学试剂厂，批号：900723)；蛋氨酸对照品(上海试剂三厂，批号：920211)；乙腈系色谱纯，2，4-二硝基氟苯(DNFB)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)及其它试剂均为分析纯；水为双蒸水。 
    1．3 色谱条件 ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：0.025mol／LNaAC-DMF(4O：60，v／v)；流速1ml／min ；柱温35℃ ；检测波长：甘草酸256nm，氨基酸360nm；进样量2Oμl。 
    2 方法与结果 
    2．1 甘草酸单铵盐的含量测定 
    2．1．1 对照品溶液的配制 精密称取甘草酸单铵盐对照品0.00505g，置1O ml量瓶内，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 ml含505μg的甘草酸单铵盐)。甘草酸单铵盐的保留时间约为4.4min。 
    2．1．2 标准曲线及线性范围 分别精密吸取对照品溶液配制成浓度为16.16ng／ml、40.40ng／ml、8O.80ng／ml、1.01μg／ml、5.05μg／ml、20.20μg／ml、4O.4Oμg／ml、101μg／ml、202μg／ml、303μg／ml的溶液，取样注入液相色谱仪，按上述色谱条件操作，以进样浓度为横坐标，以相应的基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面积为纵坐标，求得回归方程为：Y=14318 X +724.64，r=0.9996。试验结果表明：甘草酸单铵盐的进样量在40 ng／ml～300μg／ml范围内线性关系良好。 
    2．1．3 回收率试验精密称取已知含量的产品，分别加入一定量的甘草酸对照品，配制成高、中、低3种浓度，进样测定，计算回收率为98.41%，RSD=1.80 。 
    2．1．4 精密度试验取线性范围内的高、中、低浓度溶液，平行操作测定6次，每次进样2Oμl，测得日内精密度RSD=1.82%(n=6)；连续测定5d，日间精密度RSD=2.92%(n=5)。 
    2．1．5 样品含量测定 取复方甘草甜素片2O片去糖衣，研细，精密称取约0.5g，置5O ml容量瓶中，加入蒸馏水适量，超声提取30min，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取此溶液2Oμl进样测定，记录峰面积，以外标法进行计算。样品溶液色谱图。 
    2．2 两种氨基酸的含量测定 传统的氨基酸测定分析手段主要采用氨基酸分析仪，该仪器对氨基酸测定的专属性强，但仪器昂贵且不能广泛用于其他类型样品的测定。由于大多数氨基酸无紫外吸收<