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原花色素的测定方法(分光光度法)
整理时间:2008-6-25 17:17:00  查看次数:495  关键词:原花色素,分光光度法  
   本方法介绍用分光光度计测定各种植物组织、器官及其制剂(如葡萄子与松树皮提取物)中原花色素的含量。

1. 方法提要
原花色素(也称缩合单宁)是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同,黄烷醇(缩合单宁,单体,双体等)在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量。
2. 仪器
分光光度计。
3. 试剂
所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
(1)香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。
(2)提纯的原花色素或儿茶素。
(3)4%香草醛甲醇液。
(4)标准使用液:将提纯的原花色素溶于蒸馏水,制成1mg/mL储备液,将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。
如无提纯的原花色素,可用儿茶素代替,配制方法同上。
4. 测定步骤
(1)样品中原花色素的制备:植物材料经4倍体积丙酮+水(7+3,体积比)或者经60%甲醇提取,40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂,水相再经乙醚洗涤后定容。
冰冻干燥的固体原花色素制剂,直接溶于水中(先加少量甲醇助溶)制成原花色素液。
原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。
(2)样品测定:用锡箔将试管(14mm×20mm)包裹严,仅留管口用于加样。向管内加入试样0.5mL,再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合,然后加入1.5mL浓盐酸,彻底混匀,室温下显色15min。也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm处比色。
可按以上操作步骤制得标准曲线(即0.1mg原花色素在500nm处的吸收值为0.55)。
5. 结果计算
计算原花色素量的公式,
原花色素(1×10-3mg)=A500nm÷0.55×100×V
式中 V——试样稀释体积(倍数)。
6. 注释
(1)本方法的检测范围为(5~500)×10-3mg/0.5mL样液。精密度与准确度大于1×10-3mg。
(2)反应试管应用清洁剂浸泡24h,彻底洗涤干净。
(3)进行比色时,用水作空白。
(4)500nm处的OD值应控制在3以下。
(5)试样中原花色素含量较高时,应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。
(6)显色液应避光放置。

 

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