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| 分光光度计测定总胆碱的方法 |
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| 整理时间：2008-7-7 9:58:00 查看次数：1339 关键词：分光光度计，总胆碱 来源：
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| 胆碱是一种强有机碱，存在于磷脂中，又是乙酰胆碱的前体，同时具有维生素的特性。胆碱在化学上为（β-羟乙基）三甲基胺的氢氧化物，其分子式为HOCH2CH2N+（CH3）3。胆碱呈无色味苦的白色浆液，易溶于水，具有很强的吸湿性。胆碱易与酸反应生成更稳定的结晶盐（如氯化胆碱），在强碱条件下也不稳定，但对加热和贮存稳定。
胆碱广泛存在于各类食物中，尤其是动物性食物。食物中胆碱的测定方法主要有酶法、比色法。酶法的原理是将胆碱在胆碱氧化酶的作用下产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下使发色剂显色，在一定波长下测定显色的吸光度值，与胆碱浓度呈正比。此法敏感、特异性高，但是胆碱氧化酶价格比较贵，国内较难买到。本书中介绍比色法测定食物中胆碱含量，包括结合型和游离型胆碱，最小检出限为0.15mg。
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1. 原理食物中的胆碱经过处理提取后，通过Florisil柱色谱纯化，然后用雷纳克盐（Reineckate）与胆碱反应形成粉红色的胆碱－雷纳克盐复合物，这种复合物被丙酮洗脱后，在526nm有最大吸收，其吸收值与胆碱浓度成正比。
2. 适用范围参照Methods of Vitamin Assay，适用于各类食物中胆碱的测定。
3. 仪器与设备（1）实验室常用设备。（2）回流提取装置。（3）色谱柱：为0.8cm（内径）×30cm的玻璃柱，柱上端为体积30～50mL的贮液池，底端收缩变细，并装有活塞。活塞上约1cm处有一玻璃筛板，筛板孔径为16～30μm。（4）分光光度计。
4. 试剂除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。（1）甲醇。（2）氯仿。（3）乙酸甲酯。（4）丙酮：用前重蒸馏。（5）10％丙酮：取50mL丙酮溶解于450mL水中。（6）冰乙酸。（7）冰乙酸－甲醇溶液：取50mL冰乙酸和40mL甲醇混合。 |
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