高效液相色谱法测定大黄降脂粉中大黄酸、大黄素、丹参酮Ⅱ A 的含量
摘要 目的：测定大黄降脂粉中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA 的含 量。方法：高效液相
色谱法，Kromasal ODS 柱。甲醇-0.1%磷酸(265∶35) 为流动相，检测波长：254 nm，柱
温：45 ℃。结果：可同时测定大黄酸 、大黄素、丹参酮ⅡA的含量。其浓度分别在1.22～
5.55，2.25～10.73，0.33～1. 23 μg.mL-1 范围内与基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面积呈线性关系，平均回收率(n=3)
分别为104.2%( RSD＝2.5%)，96.5%(RSD=2.0%)，95.2%(RSD=2.8%)。结论：方法简便、
快速准确，可作为样品的检测方法。
关键词 高效液相色谱法 大黄酸 大黄素 丹参酮ⅡA 大黄降脂 粉
大黄降脂粉为自拟方，全方由大黄、山楂、草决明子、何首乌、茵陈、丹参、枸杞子组 成。
具有补肾活血，清热利湿，消导解毒的功效，现代药理研究证实前5味药均有降脂作用 ［1］。
丹参、枸杞子有清除自由基，防止脂质过氧化的作用［1］。为了控 制产品质量，我们对其
中大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA进行了含量测定。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪，美国Waters 公司，515 泵，2487 紫外检测器，Millennium32 色谱
管 理站，Kromasal ODS 5 μm 柱(250 mm×4.6 mm,中国科学院兰州化物所生产)。水为
双蒸 水 ，甲醇为分析纯，所用其他试剂均为分析纯。对照品购自中国药品生物制品检定所。
样品由 兰州太宝制药厂试生产，每桶25 kg。
2 色谱条件
流动相：甲醇-0.1%磷酸(265∶35)，流速：1.1 mL.min-1，柱温：45 ℃，检测波 长：
254 nm，进样量：10 μL。
3 实验方法
3.1 色谱行为 取5.64 μg.mL-1 大黄酸、8.28 μg .mL-1 大黄素、1.23 μg.mL-1 丹参酮
ⅡA 对照品甲醇溶液各1 mL 混合，进 样，其保留时间分别为：8.09，13.06，14.75 min，
3个成分峰分离良好，色谱图见图1- A。取大黄降脂粉样品溶液进样，样品中大黄酸、大黄
素、丹参酮ⅡA 分离良好，并且无杂 质峰干扰，色谱图见图1-B。取山楂、枸杞子、茵陈阴
性对照液进样，其在5.0 min以后无 干扰峰，色谱图见图1-C。
图1 色谱图
A.对照品 B.样品 C.阴性对照品
1.大黄酸 2.大黄素 3.丹参酮ⅡA
3.2 线性关系的考察 分别精密称取大黄酸5.64 mg、大黄素 4.14 mg、丹参酮ⅡA 2.46 mg
置10 mL 容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，用0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液分别稀
释成系列浓度的对照品溶液，进样10 μL，每个浓度重复测 定3次，以峰面积A 为横坐标，
浓度C 为纵坐标，进行回归处理，大黄酸、大黄素、 丹参酮ⅡA 的回归方程分别为
C=-0.657+2.8×10-5A r=0.999 9
C=-0.013 5+1.58×10-5A r=0.998 7
C=0.120+6.84×10-7A r=0.998 9
线性范围分别为1.22～5.55，2.25～10.73，0.33～1.23 μg. mL-1。
3.3 精密度试验 分别精密取5.64 μg.mL-1 大黄酸 、8.28 μg.mL-1 大黄素、1.23 μ
g.mL-1 丹参酮ⅡA 对照品甲醇溶液， 重复进样4 次，测定峰面积，RSD 分别为0.39%，
0.33%，0.30%。
3.4 稳定性试验 取同一样品溶液在0，3，6 h分别进样，记 录峰面积，大黄酸RSD=3.3%，
大黄素RSD=2.3%，丹参酮ⅡA RSD=2.3%( n=3)。
3.5 重复性试验 精密取2号样品0.250 0 g，5份，按“3.8 ”项操作，分别测定大黄酸、
大黄素、丹参酮ⅡA的含量，大黄酸RSD=0.9%，大黄素 RSD=1.2%，丹参酮ⅡA RSD=1.1%。
3.6 提取溶剂比较 精密取2 号样品，分别用水和甲醇为提取 溶剂，按“3.8”项制备样
品溶液。分别取水提样品溶液和甲醇提样品溶液10 μL进样，结 果以水为溶剂的样品只能
检出微量大黄酸和大黄素，丹参酮ⅡA检不出，因此样品测定选 择甲醇为提取溶剂。
3.7 加样回收率试验 精密取2号样品0.2500 g，分别精密加 入5.64 μg.mL-1 大黄酸、
8.28 μg.mL-1 大黄素对照品甲醇溶液各2.50 mL 及1.23 μg.mL-1 丹参酮ⅡA对照品甲醇
溶液1.5 mL，按“3.8”项操作 ，测 定大黄酸、大黄素、丹参酮ⅡA 的含量，计算回收率，
结果平均回收率分别为104.2%( RSD=2.5%)，96.5%(RSD=2.0%)，95.2%(RSD=2.8%)，
n=3。
3.8 样品测定 精密称取大黄降脂粉0.250 0 g，加适量甲醇 ，超声溶解1 h，过滤，药渣
再加甲醇适量，超声溶解，过滤，重复至滤液几乎无色，合并 滤液，定容至25 mL，用0.45 μ
m 膜过滤，续滤液为样品溶液。分别精密取5.64 μg.mL -1 大黄酸、8.28 μg.mL-1 大黄素、
1.23 μg.mL-1 丹参酮ⅡA 对 照品溶液和样品溶液各10 μL，按上述色谱条件进样测定，以
外<
